2.8 半致死量浓度(The concentration of 50% inhibition, IC50）之测定 实验前将冷冻干燥之各种药品分别经称2、4、6、8、10、12、 14、16mg以DMSO 1ml溶解,再用研钵细磨后,以0.22μl microfilter unit过滤,分别调至成不同浓度之 stock solution。每 well加入stock solution 2μl于含198μl培养基中,使最后中药浓度为40、80、120、160、200、240、280、320mg/ml。第二天观察细胞生长情形,进行 Tetrazolium反应法 (MTT assay,计算其IC50）。
2.9 细胞毒杀百分率之计算公式 CI% =1- (实验组之 OD值/对照组之 OD值）× 100%。
2.10 统计学方法 各药物之抑制率分别以平均标准偏差 (Mean ± SD)表示之,统计皆用 student’s t-test方法计算。
3 实验结果
单味药对子宫肌瘤细胞和正常细胞毒性百分比 (Cytotxicity Index )之比较;在20种单味药中，王不留行、吴茱萸、生鸡内金、水蛭 (100μg/ml )对子宫肌瘤的细胞毒性百分比 (Cytotoxity Index )较正常细胞高很多,见表2～4、图1。
图1 中药对子宫肌瘤细胞毒性百分比
表2 单味药对正常细胞和子宫肌瘤细胞的细胞毒性百分比 （略）
表3 王不留行对不同浓度子宫肌瘤细胞毒性百分比 （略）
表4 王不留行对子宫肌瘤细胞之IC50 略
半致死量浓度在不同细胞之测定结果,王不留行汲水置在子宫肌瘤细胞的浓度,都小于正常细胞的浓度,显示子宫肌瘤细胞对于这些中药较为敏感,也较正常细胞有效。
Bcl-2蛋白质Western blot分析法结果：正常子宫细胞和子宫肌瘤细胞在 Estradiol (10ng/ml )和 Progesterone (100ng/ml )加入王不留行 (100μg/ml )后, Bcl-2的变化。 Myometrium cell和 Myoma cell的第二组比第三组颜色较淡,第五组比第四组颜色较淡,显示 Bcl-2较少。子宫肌瘤中 Bcl-2 protein受Progesterone (100ng/ml )刺激而增加,受Estradiol (10ng/ml )刺激而减少,因此第四组颜色要比第三组深, Bcl-2 显示溶媒对实验结果影响不大,正常子宫细胞和子宫肌瘤细胞各有六组;第一组 Etradiol (10ng/ml )；第二组Etradiol (10ng/ml ) + 王不留行(100μg/ml )；第三组Etradiol (10ng/ml ) +DMSO 10μl；第四组Progesterone (100ng/ml ) +DMSO 10μl；第五组Progesterone (100ng/ml ) + 王不留行(100μg/ml )；第六组对照组。
子宫肌瘤细胞加入王不留行的Bcl-2测定：正常子宫细胞和子宫肌瘤细胞在 Estradio (10ng/ml )和Progesterone (100ng/ml )加入王不留行 (100μg/ml )后, Bcl-2蛋白质的变化 Myometrium和 Myoma cell的 Westen blot第二组。第五组色较淡,显示 Bcl-2较少。
4 讨论
在本实验中单味药三菱、莪术、生鸡内金、水蛭对子宫肌瘤的细胞毒性百分比反而比正常细胞较低。三菱、莪术辛苦,性平和,入肝、脾二经能入血分以破血瘀,又能走气分以气消积,可抑制血小板聚集及血栓形成,也可扩张血管改善微循环。生鸡内金、水蛭主术恶血、瘀血、月闭,破血瘕积聚。生鸡内金不仅能加强消积化瘀之功效,亦顾护脾胃,亦可以散血去瘀、消肿定痛,水蛭会产生类似前列腺环素 (prostacyclin, PGI2 )可抑制血小板凝集、降低血压并释放出胞浆素原(plaminogen )［12］。
王不留行有催乳通经、消肿止痛的功能,临床上用于乳痛、睾丸炎、流行性腮腺炎。其禁忌走而不守,血证慎用,孕妇忌用。其所含王不留行皂苷 (Vacsegoside ),经酸水解可生成王不留行次皂苷 (Vaccaroside )及黄酮类 (Saponaretin )、棉子糖 (Raffinose )、香豆素、蛋白质等。在药理作用上具有抗早孕作用,可增加血浆和子宫组织 cAMP,有抗感染作用可抑制前列腺增生,具有类似雌激素功用,对切除卵巢之白鼠可产生作用［13～15］。本篇论文共 6页,当前在第 4页 1 2 3 4 5 6 |