作者：王宇红，张水寒，蔡光先
【关键词】 鱼腥草；,,指纹图谱；,,聚类分析；,,毛细管气相色谱；,,道地性
摘要：目的建立鱼腥草挥发油的指纹图谱，为含鱼腥草中药制剂指纹图谱奠定基础。方法采用水蒸气蒸馏法提取不同产地鱼腥草的挥发油；用毛细管气相色谱技术测定指纹图谱(GCFPS)；选用聚类法分析结合含量比较判断其道地性结果该方法灵敏度高，稳定性、重现性的RSD＜3%。结论 该指纹图谱方法简便，重现性好，可作为鱼腥草药材的质量控制方法。
关键词：鱼腥草； 指纹图谱； 聚类分析； 毛细管气相色谱； 道地性
Abstract：ObjectiveTo develop the chromatographic fingerprint for the characteristic of the volatile components of Houttuynia cordatd Thunb.. MethodsVolatile components of Houttuynia cordatd Thunb. from different regions were extracted by steam distillation , and the chromatographic fingerprints were characterized by the capillary gas chromatography. The fuzzy cluster and determination were selected to compare the genuineness. ResultsThis method gave high sensitivity, reproduction and RSD was no more than 3 %. ConclusionAn analysis of the combination of chromatographic fingerprint and fuzzy cluster is convenient and accurate. It is suitable for the quality control of Houttuynia cordatd Thunb..
Key words：Houttuynia cordatd Thunb.; Fingerprint; Capillary gas chromatography; Fuzzy cluster; Genuineness
鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb．的干燥地上部分，具有清热解毒、消肿排脓、利尿通淋的功效，用于肺痈吐脓、痰热喘咳、热痢热淋、痈肿疮毒等症，因其良好的药理作用，被广泛应用于临床。现代研究表明鱼腥草主要有效成分为其挥发性物质，甲基正壬酮(methyl2 n2nonyl2ketone) 、鱼腥草素(decanoyl acetaldehyde) 、月桂烯(myrcene) 等成分［2］。本文采用气相色谱法建立鱼腥草药材的指纹图谱，结合甲基正壬酮的含量对该指纹图谱的特征峰数据进行系统聚类分析和相似度评价，为鱼腥草的质量控制提供科学依据。
1 仪器与试剂
SP-6890气相色谱仪（山东鲁南），OV-17毛细管柱（30 m×0.32 mm×0.5 μm，中科院），CT-1A氮、氢、空气发生器（武汉科林分析技术研究所）。 甲基正壬酮对照品（中国药品生物制品检定所，编号：08349501），正十五烷（色谱纯），正己烷（分析纯）。10批鱼腥草药材来源见表1。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性实验OV-17毛细管柱（30 m×0.32 mm×0.5 μm），汽化室温度200℃，FID检测器温度210℃，升温程序为：柱室初始温度60℃保持4 min，以2℃/min升温至100℃，保持2 min，再以3℃/min升温至130℃，保持2 min，再以1℃/min升温至140℃，保持2 min，再以10℃/min升温至230℃，保持1 min。分流比1∶50，柱头压0.05 Mpa，尾吹压0.04 Mpa。
2.2 参照物溶液的制备取正十五烷适量，精密称定，加用正己烷制成每毫升含5 mg的溶液，作为内标溶液。
2.3 对照品溶液的制备取甲基正壬酮对照品26 mg精密称定，置10 ml量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 供试品溶液的制备取本品75 g，研细，参照挥发油测定法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录XD甲法）蒸馏提取挥发油，自测定器上端加水使充满刻度部分，再加正己烷1 ml，连接回流冷凝管，缓缓加热至沸，并保持微沸4 h放置30 min，取正己烷层置2 ml容量瓶中，加内标溶液50 μl，加正已烷稀释至刻度，即得。
表1 鱼腥草样品来源（略）
2.5 样品的测定分别精密吸取参照物溶液、对照品溶液与供试品溶液各1 μl，注入气相色谱仪，测定，记录60 min，即得。以正十五烷色谱峰的保留时间为1计算相对保留时间，计算，即得。
2.5.1 空白实验取内标液1.0 μl，进色谱仪。见图1。
2.5.2 阳性对照实验取甲基正壬酮对照液1.0 μl，进色谱仪。见图2。取1 μl供试液进气相色谱。见图3。
图1 溶剂 内标（略）
图2 内标 对照品（略）
图3 鱼腥草药材供试液（略）
2.6 方法学研究
2.6.1 标准曲线的绘制分别吸取上述对照液0.1，0.5，0.75，1，1.5 ml，用正己烷定容至5.00 ml，摇匀。分别进样1 μl，测定各组分的保留时间和峰面积。以甲基正壬酮的质量为Y，甲基正壬酮的峰面积与正十五烷内标物的峰面积之比为X，进行线性回归分析，得回归方程为：Y=1.157X-0.03（r=0.999 2）。
2.6.2 精密度实验取同一份鱼腥草的供试品溶液连续进样5次，比较共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明，各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD＜3%，符合指纹图谱的检测要求。
2.6.3 重复性实验取同一批鱼腥草样品5份，按供试品溶液制备方法分别制备供试品溶液，比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明，各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD＜3%，符合指纹图谱的检测要求。
2.6.4 稳定性实验取同一份鱼腥草的供试品溶液，分别在制备后1，4，8，16，24，48 h进样，比较各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明，各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD＜3%，样品在48 h内稳定，符合指纹图谱的检测要求。
2.6.5 吸取内标溶液与对照品溶液1 μl，分别注入气相色谱仪，计算校正因子。分别每个批号的样品进样1.0 μl。结果见表2。
表2 10批鱼腥草样品的含量测定结果（略）
2.7 指纹图谱的建立
2.7.1 共有指纹峰的标定共有指纹峰的相对保留时间 采用相对保留时间标定共有指纹峰：以图谱中标正十五烷为参照物（s），将各色谱峰保留时间与同一图谱中参照物的保时间比较，其比值为各色谱峰的相对保留时间。分别计算10批鱼腥草样品的指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，其中12个色谱峰为样品共有，见表3～4。特标定它们为共有指纹峰。结果见图4。以图谱中正十五烷为参照峰（S），计算其它共有指纹峰的相对保留时间：峰1（0.201 6~0.246 4），峰2 (0.270 0~0.330 0)，峰3 ( 0.284 4~0.347 6)，峰4 (0.342 0~0.418 0)，峰5 (0.398 7~0.487 3)，峰6 (0.508 5~0.616 0)，峰7(0.603~0.737), 峰8（0.648 0~0.792 0），峰9 (0.664 2~0.818 8)，峰10(0.783~0.957），峰11 (0.794 7~0.971 3)，峰12 (1.000)。
